流式儀器維護避坑指南：分選噴嘴

分選噴嘴作為流式細胞儀分選功能的關鍵部件，其通暢性與完整性直接決定分選效率、細胞活性保留及數(shù)據(jù)可靠性。噴嘴的壽命受樣品處理、操作方式、清潔維護、參數(shù)設置等多重因素影響，不當使用易導致噴嘴磨損、堵塞、變形，進而引發(fā)液流不穩(wěn)、分選失敗等問題。掌握科學的使用技巧與維護方法，規(guī)避常見操作誤區(qū)，是延長分選噴嘴壽命的關鍵。以下從樣品預處理、操作規(guī)范、清潔維護、參數(shù)優(yōu)化、損傷規(guī)避五個關鍵維度，詳細闡述分選噴嘴壽命延長的實操要點與避坑指南。

嚴格樣品預處理，從源頭減少噴嘴損傷

樣品中的雜質、細胞團塊是導致噴嘴堵塞、磨損的主要誘因，預處理不徹底會讓異物隨液流進入噴嘴，造成物理損傷或堆積堵塞。常見誤區(qū)包括樣品未經(jīng)過濾直接進樣、高黏度樣品未稀釋、組織樣品解離不充分等，這些操作會縮短噴嘴壽命。

樣品預處理的關鍵要點：所有待分選樣品必須經(jīng)過 300 目尼龍濾網(wǎng)過濾，去除組織碎片、細胞團塊、纖維雜質等，過濾時可輕輕擠壓濾網(wǎng)輔助過濾，確保濾液中無肉眼可見顆粒；對于黏度較高的樣品（如血液、組織消化液、含高濃度血清的培養(yǎng)物），需用無菌緩沖液（PBS）按 1:1~1:5 比例稀釋，降低樣品黏度，避免黏附性物質在噴嘴內壁形成沉積；組織樣品需通過機械研磨與酶解結合的方式充分解離，鏡下觀察確認細胞呈單個懸浮狀態(tài)后再過濾，避免未解離的組織小塊進入噴嘴；分選前需檢查樣品懸液狀態(tài)，若存在渾濁、沉淀，需重新離心洗滌（300-400×g，5-8 分鐘），去除凋亡細胞碎片與蛋白質沉淀，減少噴嘴堵塞風險。  

此外，避免將含有高濃度染料、未溶解抗體聚集物的樣品進樣，染色后需充分洗滌，去除游離染料與抗體沉淀。

規(guī)范操作流程，避免人為操作損傷

人為操作不當是導致噴嘴變形、破損的重要原因，許多看似常規(guī)的操作細節(jié)若存在疏漏，可能造成不可逆損傷。常見誤區(qū)包括安裝或拆卸噴嘴時用力過猛、分選過程中頻繁切換參數(shù)、噴嘴接觸硬物、未完成液流穩(wěn)定即開始分選等。

規(guī)范操作的關鍵技巧：安裝噴嘴時，需先清潔噴嘴安裝座，確保無雜質殘留，手持噴嘴邊緣輕輕插入安裝位，通過卡扣或螺紋輕輕固定，避免用力按壓或擰動，防止噴嘴變形；拆卸噴嘴時，按儀器說明書步驟操作，先關閉液流系統(tǒng)，待壓力完全釋放后再拆卸，禁止在液流運行或壓力未歸零狀態(tài)下強行拆卸；分選過程中避免頻繁調整流速、壓力等關鍵參數(shù)，若需調整，需先暫停分選，待參數(shù)穩(wěn)定后再恢復，防止液流沖擊導致噴嘴損傷；操作過程中避免噴嘴接觸試管、濾網(wǎng)等硬物，放置拆卸后的噴嘴時，需置于保護盒或干凈的無菌容器中，墊以柔軟的無塵紙，防止碰撞或刮傷；啟動分選前，需確保液流系統(tǒng)完成預熱（通常 30 分鐘以上），通過儀器自帶的液流校準程序確認液流穩(wěn)定、噴射方向正常，避免在液流未穩(wěn)定狀態(tài)下啟動分選，減少液流波動對噴嘴的沖擊。

優(yōu)化清潔維護，避免殘留堆積損傷

噴嘴的清潔維護直接影響其通暢性與使用壽命，清潔不徹底會導致樣品殘留、染料沉積在噴嘴內壁，長期積累會引發(fā)堵塞，而過度清潔或清潔方式不當則可能磨損噴嘴。常見誤區(qū)包括使用尖銳工具疏通噴嘴、清潔時選用腐蝕性強的試劑、實驗后未及時清潔、清潔流程簡化等。

清潔維護的科學方法：日常清潔（實驗后）需執(zhí)行標準化流程，先啟動儀器自帶的 “沖洗程序”，用鞘液沖洗噴嘴 5-10 分鐘，去除表面殘留；再用清洗液（含溫和表面活性劑）循環(huán)沖洗 10 分鐘，溶解染料殘留與蛋白質沉積物；用無菌去離子水沖洗 5 分鐘，避免清洗液殘留。每周進行一次深度清潔，拆卸噴嘴后，將其浸泡在酶解清洗液（如含有蛋白酶、脂肪酶的清洗液）中，37℃孵育 15-20 分鐘，溶解頑固殘留，隨后用無菌水沖洗干凈，晾干后安裝；若噴嘴出現(xiàn)輕微堵塞，可采用 “反向沖洗” 程序，利用反向液流沖離異物，或用清洗液浸泡后沖洗，禁止使用牙簽、金屬針等尖銳工具疏通，避免刮傷噴嘴內壁；清潔試劑需選用儀器或兼容的產(chǎn)品，避免使用濃鹽酸等腐蝕性強的溶劑，防止噴嘴材質老化、開裂；清潔后的噴嘴需檢查外觀，若發(fā)現(xiàn)內壁有劃痕、殘留無法去除，需及時處理，避免影響液流穩(wěn)定性。

優(yōu)化運行參數(shù)，降低噴嘴運行負荷

運行參數(shù)設置與噴嘴的適配性直接影響其磨損速度，長期在不適配的參數(shù)條件下運行，會加劇噴嘴的機械損耗。常見誤區(qū)包括流速設置過高、壓力過大、噴嘴孔徑與細胞大小不匹配、長期連續(xù)分選等。

參數(shù)優(yōu)化的關鍵策略：根據(jù)細胞大小選擇適配的噴嘴孔徑，如分選淋巴細胞等小型細胞可選用 70μm 噴嘴，分選干細胞、巨噬細胞等較大細胞則選用 100μm 噴嘴，避免用小孔徑噴嘴分選大細胞，或小孔徑噴嘴設置過高流速，導致細胞與噴嘴內壁過度摩擦；流速與壓力設置需遵循 “適配性” 原則，根據(jù)噴嘴孔徑調整，70μm 噴嘴流速通常控制在 10-15μL/min，100μm 噴嘴控制在 15-20μL/min，壓力設置以液流穩(wěn)定、細胞順利通過為標準，避免盲目提高壓力或流速；合理安排分選實驗，避免長時間連續(xù)分選，建議每運行 2-3 小時暫停 10-15 分鐘，讓噴嘴與液流系統(tǒng)短暫冷卻，減少持續(xù)高壓對噴嘴的沖擊；分選高濃度樣品時，可適當降低進樣速度，避免細胞在噴嘴內過度擁擠摩擦，同時減少分選頻率，降低噴嘴的機械負荷；定期校準液流參數(shù)，確保實際流速、壓力與設定值一致，避免參數(shù)漂移導致噴嘴運行負荷增加。

規(guī)避常見損傷誤區(qū)，及時處理異常情況

許多隱性操作誤區(qū)易被忽視，卻可能對噴嘴造成長期損傷，同時及時處理異常情況能避免小問題擴大。常見誤區(qū)包括忽視儀器報警信息、使用污染的鞘液或清洗液、長期閑置儀器未做維護、噴嘴混用等。