臨床流式檢測標準化操作指南（一）

一、指南目的與適用范圍

本指南旨在規(guī)范臨床流式檢測的全流程操作，包括樣本管理、試劑耗材準備、儀器操作、檢測實施、數(shù)據(jù)分析、質(zhì)量控制及廢棄物處理等環(huán)節(jié)，減少因操作差異導致的結(jié)果波動，確保檢測過程合規(guī)、結(jié)果可靠，為臨床診斷監(jiān)測及健康評估提供支持。

本指南適用于各級醫(yī)療機構(gòu)臨床檢驗科、第三方醫(yī)學檢測機構(gòu)開展的流式檢測項目，涵蓋常見檢測類型（如淋巴細胞亞群分析、細胞活性檢測、細胞周期分析等），不適用于科研性質(zhì)的流式實驗。

 

二、樣本管理標準化

1.樣本采集規(guī)范

樣本類型與容器選擇：外周血樣本需使用含EDTA抗凝劑的真空管（紫色帽），避免使用肝素抗凝（可能干擾熒光信號）；骨髓樣本需用骨髓抗凝管，采集后輕輕顛倒5-8次，確保抗凝劑與樣本充分混合；體液樣本（如胸腔積液、腹腔積液）需在采集容器中預先加入EDTA抗凝劑（終濃度0.5-1mg/mL），避免樣本凝固。

采集量要求：外周血樣本采集量不少于2mL，骨髓樣本不少于1mL，體液樣本不少于3mL，確保滿足檢測與復查需求；兒童或特殊患者樣本量不足時，需在申請單注明，優(yōu)先采用微量檢測流程。

采集后處理時限：樣本采集后需在2小時內(nèi)送至實驗室，4℃條件下保存不超過24小時；若無法及時檢測，需標注保存時間與溫度，復溫至室溫后再進行預處理，避免反復凍融。

2.樣本接收與核對

接收流程：實驗室接收樣本時，需核對申請單與樣本信息一致性，包括患者姓名、性別、年齡、樣本編號、檢測項目、采集時間、抗凝劑類型；檢查樣本外觀，確認無溶血、凝固、滲漏（溶血樣本需記錄溶血程度，嚴重溶血需重新采集）。

樣本登記：將樣本信息錄入實驗室信息系統(tǒng)（LIS），分配檢測編號，記錄接收時間、樣本狀態(tài)，由接收人與核對人雙簽字確認，確保樣本可追溯。

 

三、試劑與耗材準備標準化

1.試劑管理規(guī)范

試劑選擇：優(yōu)先使用經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局注冊的臨床流式檢測試劑（如熒光標記抗體、溶血劑、固定劑、破膜劑），試劑包裝需完整，標簽清晰標注名稱、批號、有效期、儲存條件。

試劑儲存與取用：熒光抗體需按說明書要求避光冷藏（2-8℃），避免反復凍融（單次凍融后需在24小時內(nèi)使用）；溶血劑、鞘液等常溫儲存試劑需遠離陽光直射與熱源，開封后記錄使用起始時間，有效期不超過說明書規(guī)定（未明確規(guī)定時，開封后不超過3個月）。

試劑驗證：新批次試劑使用前需進行驗證，取標準質(zhì)控品（如淋巴細胞亞群質(zhì)控品）按常規(guī)流程檢測，對比該批次與上一批次試劑的檢測結(jié)果（如細胞亞群比例、熒光信號強度），差異在5%以內(nèi)視為驗證合格，方可用于臨床樣本檢測。

2.耗材選擇與檢查

耗材類型：樣本管需使用無酶、無熒光干擾的聚丙烯離心管（12×75mm規(guī)格）；過濾耗材選用30-50μm孔徑的尼龍濾網(wǎng)，避免使用棉質(zhì)濾網(wǎng)（可能殘留纖維干擾檢測）；移液吸頭需為無RNA酶、無DNA酶的無菌吸頭，防止樣本污染。

耗材檢查：使用前檢查耗材包裝是否完好，有無破損、過期；樣本管需無刻度模糊、管壁變形，濾網(wǎng)需無孔隙堵塞，確保耗材符合檢測要求。

 

四、儀器操作標準化

1.儀器開機與預熱

開機前檢查：確認儀器電源、數(shù)據(jù)線連接正常；檢查鞘液桶液位（需高于低刻度線）、廢液桶液位（需低于高刻度線），不足時及時補充或清空；清潔儀器表面與進樣倉，去除灰塵與殘留樣本。

開機流程：按儀器說明書順序啟動，先開啟主機電源，待儀器自檢完成（通常5-10分鐘）后，打開操作軟件；選擇“儀器預熱”模式，預熱時間不少于30分鐘（激光模塊需達到穩(wěn)定功率），預熱期間禁止進行樣本檢測。

2.儀器校準

光學系統(tǒng)校準：每日檢測前使用多色熒光微球校準（如BDCalibrite微球），在軟件中調(diào)用“光學校準”程序，檢測各熒光通道（如FITC、PE、APC）的信號強度與變異系數(shù)，確保信號落在標準區(qū)間內(nèi)；若某通道信號偏移，按軟件提示調(diào)整激光功率或通道增益，校準完成后保存校準記錄。

進樣體積校準：每季度使用體積校準品（含已知濃度計數(shù)微球）進行校準，設(shè)置進樣體積（如100μL），檢測微球計數(shù)結(jié)果，計算實際進樣體積與設(shè)定體積的偏差，偏差需小于5%；偏差過大時，調(diào)整進樣泵壓力或速度，重新校準直至合格。