如何用質(zhì)控品與校準(zhǔn)物確保檢測(cè)結(jié)果的可靠性

在流式細(xì)胞儀檢測(cè)過(guò)程中，儀器性能波動(dòng)、試劑批次差異、操作習(xí)慣不同等因素，都可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)偏差。要讓結(jié)果長(zhǎng)期保持穩(wěn)定且符合預(yù)期，不能只依賴(lài)儀器自身的默認(rèn)設(shè)置，而需通過(guò)質(zhì)控品與校準(zhǔn)物的規(guī)范使用，構(gòu)建“儀器校準(zhǔn)—過(guò)程監(jiān)控—結(jié)果驗(yàn)證”的全流程保障體系。質(zhì)控品與校準(zhǔn)物雖作用不同，但二者協(xié)同配合，能從基礎(chǔ)性能校準(zhǔn)到日常檢測(cè)監(jiān)控，層層把控影響結(jié)果的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，確保每一次檢測(cè)數(shù)據(jù)都具有可追溯性與一致性。

校準(zhǔn)物的主要作用是讓儀器的主要性能指標(biāo)處于標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)，為后續(xù)檢測(cè)建立統(tǒng)一基準(zhǔn)。流式檢測(cè)中，儀器的光學(xué)系統(tǒng)（激光功率、熒光通道靈敏度）與液流系統(tǒng)（進(jìn)樣體積精度是影響結(jié)果的關(guān)鍵，需通過(guò)對(duì)應(yīng)的校準(zhǔn)物定期校準(zhǔn)。針對(duì)光學(xué)系統(tǒng)，常用的校準(zhǔn)物是多色熒光微球——這類(lèi)微球表面偶聯(lián)有已知強(qiáng)度的熒光分子，能模擬細(xì)胞的熒光信號(hào)。使用時(shí)，將熒光微球樣本放入儀器，儀器會(huì)自動(dòng)檢測(cè)各熒光通道的信號(hào)強(qiáng)度，操作人員需根據(jù)微球的標(biāo)準(zhǔn)熒光強(qiáng)度范圍，調(diào)整激光功率或通道增益，讓微球信號(hào)落在預(yù)設(shè)的標(biāo)準(zhǔn)區(qū)間內(nèi)。例如，檢測(cè)FITC通道時(shí)，若微球的FITC信號(hào)強(qiáng)度低于標(biāo)準(zhǔn)范圍，需適當(dāng)提高488nm激光的功率，直至信號(hào)達(dá)標(biāo)；若信號(hào)過(guò)高，則降低增益，避免探測(cè)器飽和。針對(duì)液流系統(tǒng)的進(jìn)樣體積精度，需使用體積校準(zhǔn)物——這類(lèi)校準(zhǔn)物含有已知濃度的計(jì)數(shù)微球，通過(guò)檢測(cè)一定體積內(nèi)微球的數(shù)量，反推儀器實(shí)際進(jìn)樣體積與設(shè)定體積的偏差。若設(shè)定進(jìn)樣體積為100μL，但檢測(cè)到的微球數(shù)量只為標(biāo)準(zhǔn)值的90%，說(shuō)明實(shí)際進(jìn)樣體積偏小，需調(diào)整進(jìn)樣泵的壓力或速度，確保進(jìn)樣精度符合要求。校準(zhǔn)并非一次性操作，而是需定期進(jìn)行：新機(jī)安裝后需完成校準(zhǔn)，日常使用中每1-2周進(jìn)行一次光學(xué)校準(zhǔn)，每季度進(jìn)行一次體積校準(zhǔn)；若儀器出現(xiàn)故障維修、更換主要部件（如激光模塊、進(jìn)樣針），或檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)明顯異常時(shí)，需立即重新校準(zhǔn)，避免因儀器性能偏移導(dǎo)致后續(xù)檢測(cè)數(shù)據(jù)失真。

質(zhì)控品的作用是監(jiān)控日常檢測(cè)過(guò)程中的變量，及時(shí)發(fā)現(xiàn)試劑、操作或儀器漂移帶來(lái)的問(wèn)題。與校準(zhǔn)物聚焦“儀器性能標(biāo)準(zhǔn)”不同，質(zhì)控品更貼近實(shí)際檢測(cè)場(chǎng)景，能模擬真實(shí)樣本的檢測(cè)過(guò)程，反映從樣本處理到信號(hào)采集全流程的穩(wěn)定性。流式檢測(cè)中常用的質(zhì)控品分為室內(nèi)質(zhì)控品與室間質(zhì)控品。室內(nèi)質(zhì)控品由實(shí)驗(yàn)室自行配置或購(gòu)買(mǎi)，多為穩(wěn)定的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞懸液（如固定的外周血白細(xì)胞、標(biāo)準(zhǔn)化的細(xì)胞系）或凍干質(zhì)控品（復(fù)溶后可直接使用），其目標(biāo)標(biāo)志物的表達(dá)比例或熒光信號(hào)強(qiáng)度已知且長(zhǎng)期穩(wěn)定。日常檢測(cè)時(shí)，需將質(zhì)控品與待檢樣本按相同流程處理——例如檢測(cè)TBNK樣本時(shí)，同時(shí)處理一份室內(nèi)質(zhì)控品，同樣進(jìn)行溶血、熒光抗體標(biāo)記、上樣檢測(cè)，然后對(duì)比本次檢測(cè)的質(zhì)控結(jié)果與歷史均值的差異。若質(zhì)控品中CD4+T細(xì)胞的比例歷史均值為30%，本次檢測(cè)結(jié)果為25%，且連續(xù)3次檢測(cè)均呈下降趨勢(shì)，說(shuō)明檢測(cè)過(guò)程存在問(wèn)題，需逐一排查：是否新批次抗體效價(jià)降低、樣本孵育溫度是否偏離標(biāo)準(zhǔn)（如室溫過(guò)高或過(guò)低）、儀器熒光通道是否出現(xiàn)漂移。室內(nèi)質(zhì)控品需每次檢測(cè)都伴隨使用，且需建立質(zhì)控圖記錄結(jié)果，通過(guò)設(shè)定控制范圍（如均值±2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差）判斷是否“在控”，若結(jié)果超出范圍，需暫停檢測(cè)，解決問(wèn)題后重新驗(yàn)證質(zhì)控合格，才能繼續(xù)檢測(cè)待檢樣本。室間質(zhì)控品則由機(jī)構(gòu)（如國(guó)家臨床檢驗(yàn)中心）發(fā)放，用于不同實(shí)驗(yàn)室間的結(jié)果比對(duì)，其樣本特性更復(fù)雜，檢測(cè)結(jié)果需上報(bào)至機(jī)構(gòu)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。若實(shí)驗(yàn)室的室間質(zhì)控結(jié)果與其他實(shí)驗(yàn)室的均值偏差較大，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)流程或操作規(guī)范可能存在不足，需參考實(shí)驗(yàn)室的方案優(yōu)化自身流程，例如調(diào)整抗體標(biāo)記的孵育時(shí)間、優(yōu)化熒光補(bǔ)償設(shè)置，確保實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果與行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)保持一致。

質(zhì)控品與校準(zhǔn)物并非單獨(dú)使用，而是需協(xié)同配合，形成“校準(zhǔn)打底—質(zhì)控監(jiān)控—問(wèn)題回溯”的閉環(huán)。實(shí)際檢測(cè)中，需先完成儀器校準(zhǔn)，確保儀器性能處于標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)，再用室內(nèi)質(zhì)控品驗(yàn)證流程穩(wěn)定性——若校準(zhǔn)后質(zhì)控結(jié)果仍不合格，說(shuō)明問(wèn)題并非出在儀器性能，而是試劑（如抗體失效）或操作（如樣本處理錯(cuò)誤）；若質(zhì)控合格，才能開(kāi)始檢測(cè)待檢樣本。日常檢測(cè)中，若室內(nèi)質(zhì)控品出現(xiàn)失控，需先排查是否儀器性能偏移，此時(shí)可通過(guò)校準(zhǔn)物重新校準(zhǔn)儀器，若校準(zhǔn)后質(zhì)控恢復(fù)正常，說(shuō)明是儀器漂移導(dǎo)致；若校準(zhǔn)后質(zhì)控仍失控，則需排查試劑或操作環(huán)節(jié)。室間質(zhì)控結(jié)果異常時(shí)，也需結(jié)合校準(zhǔn)記錄與室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)：若室內(nèi)質(zhì)控長(zhǎng)期穩(wěn)定，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部流程無(wú)問(wèn)題，可能是室間質(zhì)控品的處理方式與自身流程不匹配，需按機(jī)構(gòu)要求調(diào)整；若室內(nèi)質(zhì)控也存在波動(dòng)，則需先通過(guò)校準(zhǔn)物穩(wěn)定儀器，再優(yōu)化室內(nèi)質(zhì)控流程，待室內(nèi)質(zhì)控合格后，再重新參與室間質(zhì)控。這種協(xié)同模式能避免依賴(lài)校準(zhǔn)或質(zhì)控導(dǎo)致的漏洞——只校準(zhǔn)儀器無(wú)法發(fā)現(xiàn)試劑失效問(wèn)題，只使用質(zhì)控品無(wú)法定位儀器性能偏移的根源，二者結(jié)合才能覆蓋檢測(cè)全流程的風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)。

此外，無(wú)論是校準(zhǔn)物還是質(zhì)控品，都需注意正確的儲(chǔ)存與使用方式，避免因質(zhì)控品/校準(zhǔn)物自身不穩(wěn)定影響結(jié)果。熒光微球校準(zhǔn)物需避光冷藏保存，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致微球聚集；凍干質(zhì)控品需嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)復(fù)溶，復(fù)溶后在規(guī)定時(shí)間內(nèi)使用，不可長(zhǎng)時(shí)間放置；室內(nèi)質(zhì)控品若為細(xì)胞懸液，需定期檢查細(xì)胞活性，避免細(xì)胞裂解或變質(zhì)。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)室需建立完整的記錄體系，詳細(xì)記錄每次校準(zhǔn)的時(shí)間、校準(zhǔn)物批次、校準(zhǔn)前后的參數(shù)變化，以及每次質(zhì)控的結(jié)果、排查過(guò)程與處理措施，這些記錄不只能為后續(xù)問(wèn)題回溯提供依據(jù)，也能幫助實(shí)驗(yàn)室總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，優(yōu)化校準(zhǔn)與質(zhì)控的頻率和流程。

用質(zhì)控品與校準(zhǔn)物確保檢測(cè)結(jié)果可靠性，主要是“先立標(biāo)準(zhǔn)，再控過(guò)程”——通過(guò)校準(zhǔn)物讓儀器性能穩(wěn)定在統(tǒng)一基準(zhǔn)，再通過(guò)質(zhì)控品監(jiān)控日常流程中的變量，二者協(xié)同形成閉環(huán)管理。這一過(guò)程無(wú)需追求復(fù)雜的操作，而是需嚴(yán)格遵循規(guī)范，將校準(zhǔn)與質(zhì)控融入檢測(cè)全流程，讓每一次檢測(cè)都有標(biāo)準(zhǔn)可依、有數(shù)據(jù)可查，確保結(jié)果的穩(wěn)定性與一致性，為科研分析或臨床決策提供可靠的數(shù)據(jù)支持。